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發(fā)布時(shí)間： 2017-08-21 點(diǎn)擊次數(shù)： 1531次elisa試劑盒操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。上海研域elisa試劑盒組成
標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。組織處理：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
elisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算
應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬生長(zhǎng)激素(GH)水平。用純化的豬生長(zhǎng)激素(GH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入生長(zhǎng)激素(GH)，再與HRP標(biāo)記的生長(zhǎng)激素(GH)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的，顏色的深淺和樣品中的生長(zhǎng)激素(GH)呈正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）。