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    ELISA試劑盒的回收率

    發(fā)布時(shí)間: 2013/7/30  點(diǎn)擊次數(shù): 957次
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     elisa試劑盒 - ELISA簡介
    ELISA的基礎(chǔ)是 抗原或 抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。ELISA試劑盒結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其 免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。
    然而,影響Elisa試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。
    elisa試劑盒 - ELISA試劑盒的回收率
    elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系,說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機(jī)氯含量測(cè)定,樣品水中含有無機(jī)氯20mg/L,取100mL被測(cè)水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,測(cè)定時(shí)忽略體積變化,如果測(cè)定出樣品中無機(jī)氯為2.98mg/L,則認(rèn)為回收率為98%。
    對(duì)于定量檢測(cè)來說,主要還是一個(gè)準(zhǔn)確度的驗(yàn)證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好,所以就貼上去了。相對(duì)回收率可能會(huì)高于100%的,如果只是說“損失程度”,其實(shí)是不準(zhǔn)確的。應(yīng)該說,回收率越接近100%,說明這個(gè)試劑盒的準(zhǔn)確度越高。
    elisa試劑盒 - Elisa的發(fā)展
    臨床測(cè)定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展,而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。目前,分子生物學(xué)正在并zui終肯定會(huì)讓我們對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而*的認(rèn)識(shí),其對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,它使我們對(duì)以前一些難以檢測(cè)的 生物活性物質(zhì)的測(cè)定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。
    elisa試劑盒 - ELISA試劑盒的制備方法
    包括以下步驟:
    1)抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選;
    2)抗原的制備;
    3)血清的采集;
    4)間接ELISA方法的建立;
    5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證;
    6)試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證;
    7)對(duì)屠宰場(chǎng)進(jìn)行臨床檢測(cè)。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出感染豬的戊型肝炎病毒,適用于大批量發(fā)病樣本的檢測(cè),可用于豬戊肝的快速診斷,并預(yù)防、控制豬戊肝病毒的流行和阻斷戊肝病毒由豬向人傳播。
    elisa試劑盒 - 基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響
    ELISA試劑盒免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷試劑離不開的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的 單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用 基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。 
             HBsAg試劑特點(diǎn)(檢測(cè)模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,可測(cè)得HBsAg變異樣品,提高檢測(cè)的特異性(99.98%)提高檢測(cè)的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
    elisa試劑盒 - 測(cè)試劑盒檢測(cè)原理
    ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測(cè)技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是 中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入 孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP( 辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),ELISA試劑盒并在波長: 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。

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